Analyse der Funktion von Signaladaptoren zelltodvermittelnder Rezeptoren

In dieser Arbeit sollte untersucht werden, auf welchem Wege die
beiden Zelltodrezeptoren TNFR1 und Fas Apoptose in den Zelllinien
A9 und SV80 ausführen. Ausgangspunkt waren widersprüchliche
Erkenntnisse über die Signalwege von TNFR1 und Fas. So war in der
Literatur beschrieben, daß TNFR1 und Fas die gleichen
intrazellulären Signalmoleküle benutzen um Apoptose auszulösen. Als
diese Signalmoleküle wurden FADD, TRADD und FLICE identifiziert.
Ergebnisse aus unserem Labor zeigten jedoch, daß in A9 Zellen der
durch Fas oder TNFR1 ausgelöste Zelltod unterschiedliche Signalwege
beschreiten musste, da sich der durch TNFR1 ausgelöste Zelltod
bezüglich der Hemmbarkeit durch verschiedene Inhibitoren der
Apoptose deutlich von dem durch Fas ausgelösten Zelltod
unterschied. Es sollte untersucht werden, ob in SV80 und A9
Zelllinien FADD als gemeinsames Signalprotein beider
Zelltodrezeptoren benutzt wird, oder bereits auf dieser Ebene ein
Unterschied festzustellen ist. Dazu wurde FADD kloniert, und die
Mutante DFADD von FADD hergestellt, die in der Lage ist, den bisher
bekannten Signalweg von FADD in einer dominant negativen Weise zu
hemmen. FADD und DFADD wurden in A9 und SV80 Zellen zur Expression
gebracht. In SV80 Zellen führte Überexpression von FADD wie
erwartet zu Zelltod, Expression von DFADD schützte nach Stimulation
des TNFR1 oder Fas wie erwartet vor Zelltod. Expression von FADD in
A9 Zellen führte zu Zelltod. Überraschenderweise führte jedoch auch
Expression von DFADD in A9 zu Zelltod. Es war unerwartet, daß die
Mutante, die den bisher bekannte Signalweg von FADD blockieren
sollte, selbst Zelltod auslösen kann. Um die Art der Wirkung dieser
Mutante DFADD weiter zu charakterisieren wurde versucht, den durch
DFADD vermittelten Zelltod durch verschiedene Klassen von
Hemmstoffe der Apoptose zu inhibieren. Zum einen
Apoptoseinhibitoren, die über Hemmung der Caspasen wirken, zum
anderen solche, die durch Hemmung der Atmungskette Apoptose
unterbinden. Des weiteren wurde das Signalmolekül RAIDD und
verschiedene dominant negative Mutanten kloniert, um zu
untersuchen, ob DFADD in der Lage ist weitere Signalproteine zu
aktivieren und so Zelltod auszulösen.