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  3. Medizinische Fakultät - Digitale Hochschulschriften der LMU - Teil 14/19 Podcast
  4. Etablierung genetischer Modellsysteme der kolorektalen Karzinogenese und Abhängigkeit onkogener Merkmale von B-Raf(V600E)
Für ein genetisches Modell B-Raf(V600E)-mutierter Darmkrebszellen
und korrespondierender Wildtyp-Zellen wurde erstmalig in
Deutschland das Somatic Cell Gene Targeting eingesetzt. Dabei
konnte demonstriert werden, dass RKO eine Oncogene Addiction
bezüglich der BRAF-Mutation aufweist. Als weitere
B-Raf(V600E)-abhängige Effekte wurden die Selbstversorgung mit
Wachstumssignalen (Self-Sufficiency of Growth Signals) und die
Resistenz gegen Apoptose in dem Modell festgestellt. Darüber hinaus
war die proliferative Kontaktinhibition in V600E-mutierten Klonen
durch eine verstärkte Akt-Phosphorylierung aufgehoben und wurde
nach Knockout der mutierten Allele im Wildtyp-Zellklon RBW-1 wieder
hergestellt. Somit konnten vier zentrale Merkmale der Onkogenität
dem mutierten B-Raf(V600E) zugeordnet werden. Andere onkogene
Mechanismen waren dagegen vermutlich aufgrund einer Mutation der
PI3-Kinase auch in BRAF-Wildtyp-Zellen noch intakt. So waren das
Wachstum unter guten Kulturbedingungen und eine verstärkte
Expression des EGF-Rezeptors unter Mangelbedingungen nicht vom
BRAF-Mutationsstatus abhängig. Außerdem behielten Wildtyp-Zellen
ihre Immortalisierung bei und zeigten weiterhin kein relevantes
Auftreten von Seneszenz. Es wurden neue Spleißvarianten des
BRAF-Gens gefunden und basal charakterisiert. Die alternativen
Transkripte zeigten keine Kinase-Aktivität und waren in einem
Ausmaß nachweisbar, das eine physiologische Bedeutung vermuten
lässt. Hinsichtlich der Herkunft-Allele alternativer Isoformen und
den Ursachen für das Auftreten alternativen Spleißens wurden neue
Erkenntnisse gewonnen, die zudem die Interpretation publizierter
Daten erleichtern. Es wurde gezeigt, dass die durch E-Cadherin
vermittelten Zellkontakte essentiell für die epitheliale Komponente
der intestinalen Barriere sind. Darüber hinaus wurde der Einfluss
von E-Cadherin auf die Ausreifung sekretierender Zellen im Darm
ermittelt und damit ein weiterer entscheidender Mechanismus der
Abwehr bakterieller Invasionen aufgeklärt.

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