Medizinische Fakultät - Digitale Hochschulschriften der LMU - Teil 09/19 Archiv
248 Episoden
1 minute
Recent evidence has shown the increased incidence of PA in approximately 15% of the hypertensive population, making a non-invasive and simple screening method for the measurement of aldosterone levels necessary. The use of saliva for determination of steroid hormones is now widely used and accepted and salivary aldosterone concentrations have previously been reported at around 30% of those seen in plasma. Furthermore, there is a current lack of longitudinal and systematic studies addressing the involvement of aldosterone in the regulation of the RAAS in rodents due to sample volume restrictions and the lack of sensitivity to detect the very low aldosterone concentrations in commercially available assays. We developed a non-isotopic, competitive immunoassay for the determination of aldosterone levels in saliva, as well as in human and mouse plasma samples. The assay employs an aldosterone-biotin conjugate as the tracer and end-point determination through time-resolved fluorescence (TR-FIA) with Streptavidin-Europium as the detectable label. No pretreatment or purification of saliva is necessary while a simple extraction step is incorporated for the assessment of plasma levels. A polyclonal antibody was used for the development of the saliva assay giving a lower limit of detection of 19 pg/ml for each 50µl sample. Similarly, a highly specific monoclonal antibody against aldosterone, exhibiting a more sensitive linear working range starting from 8 pg/ml is used to detect aldosterone in 50µl of plasma. The monoclonal antibody could potentially also be used for the determination of salivary aldosterone levels, however this was not sufficiently evaluated in the studies shown here and further investigation of the exact assay conditions is needed. Inter- and intra-assay coefficients of variation, mean recoveries, accuracy and linearity were validated for both assays and the assay results correlated significantly with a commercially available radioimmunoassay for plasma in both settings. Overall, salivary aldosterone was found to correspond to approximately 28% of the concentrations seen in plasma and reflected the changes seen with posture and ACTH stimulation accurately. The assay presents the additional possibility of using salivary aldosterone levels, in combination with salivary cortisol, as a diagnostic tool in a clinical setting to screen suspected cases of PA and exclude healthy subjects. The salivary aldosterone to cortisol ratio remains elevated in PA persons due to autonomous hypersecretion of aldosterone throughout the day, alongside decreasing levels of cortisol, and can be clearly distinguished from healthy persons above a cut-off level of 0.1. Furthermore, as aldosterone concentrations are acutely affected by ACTH it was determined that sampling for this test should be carried out in the evening to avoid stress factors as well as diurnal fluctuations. In addition, as basal aldosterone values and those after suppression and stimulation under different conditions were found within the linear range of the assay, it is proposed that the assay could be especially useful to monitor adrenocortical function in pharmacological and dietary intervention studies in rodent models where repeated sampling and volumes collected are limited and measurement of multiple blood parameters is desirable.
1 minute
According to recently published studies two types of entheses are discussed, a fibrous and a fibrocartilaginous one. The fibrous enthesis is seen transmitting only tensile forces of muscle to the bone, while the fibrocartilaginous enthesis in addition is also seen dissipating stress away from the hard- soft- tissue- interface. The pisiforme bone in its role as a bony pulley (Hypomochlion) splits the force of the m. flexor carpi ulnaris on two ligaments. One of those is running in line of the tendon from the m. flexor carpi ulnaris, while the other branch is running in an angle of 45° according to them. The aim of the present study is to describe the molecular composition of the insertions from the pisiforme bone, expecting both types of entheses. Eleven pisiform bones are taken from bodies at the latest 48h post mortem. They were fixed in methanol, decalcified and cryosectioned. Sections were labelled with monoclonal antibodies directed against collagens, glycosaminoglycans proteoglycans and other specific matrixproteins. All attachment sites showed fibrocartilaginous entheses. Typically these zones of fibrocartilage are labelling strongly for type II collagen, aggrecan and link- protein. The ligaments themselves are labelling for collagen type I and III, chondroitin 4 sulfate, keratan and dermatan sulfate, versican and tenascin. The area of the fibrocartilaginuos region is varying between the entheses, which is interpreted as functional adaptation to the prevailing forces.
1 minute
Herz-Kreislauf-Erkrankungen stellen heute in der westlichen Welt die häufigste Todesursache überhaupt dar. In der Vergangenheit wurde deshalb zu deren Therapie bereits eine Vielzahl an medikamentösen und chirurgischen Behandlungsmöglichkeiten entwickelt, die jedoch insbesondere in schweren Erkrankungsfällen keine langfristig zufrieden stellenden Optionen bieten konnten. Von Embryonalen Stammzellen (ES-Zellen) erhofft man sich deshalb ganz neue, zelltherapeutische Möglichkeiten. Durch das Potential, vitales Herzmuskelgewebe aus diesen pluripotenten Zellen in vitro generieren zu können, eröffnen sich dabei für die kausale Behandlung der Herzinsuffizienz bisher ungeahnte Perspektiven. Zwei der Hauptprobleme bei der Gewinnung von Kardiomyozyten aus der differenzierten ES-Zell-Kultur stellen jedoch zum einen der geringe Anteil von Herzmuskelzellen an der Mischkultur und zum anderen deren schwierige hochselektive Aufreinigung dar. Durch Entschlüsselung der Stammzellentwicklung und der daran beteiligten Faktoren und Signalkaskaden könnte es jedoch in Zukunft möglich werden, die Steuerung für diese Differenzierung zu übernehmen, um so aus den hoch proliferativen, pluripotenten Vorläuferzellen Kardiomyozytenreinkulturen gewinnen zu können. In der vorliegenden Arbeit wurde der früh während der Embryonalentwicklung exprimierte Transkriptionsfaktor mesoderm posterior 1 (MesP1) als mögliche Schlüsselkomponente der kardiovaskulären Entwicklung detailliert untersucht. Mithilfe eines dafür konstruierten Vektors konnte der Faktor MesP1 in stabil-transfizierten, murinen embryonalen Stammzellen überexprimiert – und so dessen induktive Wirkung auf die Entwicklung von Herz- und Endothelzellen während der ES Zell-Differenzierung auf molekularer wie auch zellulärer Ebene nachgewiesen werden. So zeigte sich in den transgenen Zellen bereits zu einem frühen Zeitpunkt der Entwicklung eine verstärkte Expression u. a. der frühen kardialen Transkriptionsfaktoren Nkx2.5 und GATA-4, die sich später während der Differenzierung in einer mehrfach erhöhten Ausbeute an Kardiomyozyten und Endothelzellen in der Zellkultur widerspiegelte. Die Funktionalität der amplifizierten Kardiomyozyten bezüglich Kontraktionsfrequenz und Reagibiliät auf vegetative Reize blieb dabei unverändert erhalten. Bei der Analyse der Keimblattentwicklung fiel auf, dass durch Überexpression des mesoderm posterior 1 in den transgenen Zellen die Menge an Gesamtmesoderm unverändert blieb, jedoch innerhalb dieses Keimblattes die Differenzierung deutlich in Richtung kardiovaskulär und zu Lasten der Skelettmuskelentwicklung verschoben war. Im Ektoderm zeigte sich eine verstärkte neurale Entwicklung, induziert durch die vermehrt vorhandenen kardiogenen Zellen. Die Bildung des Endoderms war unbeeinträchtigt. Im Folgenden konnte schließlich in Untersuchungen zur Signaltransduktion der Mechanismus der MesP1-vermittelten kardiovaskulären Induktion aufgeklärt werden, indem der Faktor Dickkopf-1, ein Inhibitor des Wnt-Signalweges, als Zielgen des Transkriptionsfaktors MesP1 identifiziert und in Folgeversuchen mittels Bandshift auch bestätigt werden konnte. Die Blockade des Wnt-Signalweges ist verantwortlich für die Initiierung der kardiovaskulären Differenzierung während der Embryonalentwicklung. MesP1 stellt damit einen besonderen Faktor während der Embryogenese dar und einen wichtigen Startpunkt für die weitere Entzifferung der komplexen Signaltransduktionskaskaden der Herz- und Gefäßentwicklung. Das vollständige Verständnis dieses komplexen Netzwerkes sowie die Übertragung auf das humane ES-Zell-System könnte es einmal ermöglichen, Herzmuskelerkrankungen des Menschen mit embryonalen Stammzellen therapieren zu können.
