Regulation von Apoptose und Überleben durch Signalwege von LMP1 und TNF-Rezeptor 1

TRADD spielt als Adaptermolekül eine zentrale Rolle in der
Signaltransduktion von LMP1 und TNF-Rezeptor 1. Während es
allerdings durch den TNFR1 neben der Aktivierung verschiedener
Signalwege auch zur Induktion von Apoptose und Nekrose kommt,
handelt es sich bei LMP1 um ein Protein mit transformierendem
Potential. Bei den jeweiligen TRADD-Bindestellen von LMP1 und TNFR1
handelt es sich um zwei strukturell vollkommen unterschiedliche
Domänen. Und auch auf der Seite von TRADD wird die Bindung über
zwei verschiedene Domänen vermittelt. Im Rahmen dieser Doktorarbeit
sollte die Frage beantwortet werden, ob die TRADD-Bindestelle
intrinsisch die biologischen Effekte der Signaltransduktion
bestimmt oder ob diese durch den Rezeptorkontext festgelegt werden.
Zur Beantwortung dieser Frage wurde in einem Domain Swapping
Experiment die TRADD-Bindestelle des konstitutiv aktiven LMP1-TNFR1
sowie des TNFR1 gegen die putative TRADD-Bindestelle von LMP1
ausgetauscht. Es konnte erstmals gezeigt werden, dass die
Aminosäuren 370-386 die vollständige TRADD-Bindestelle von LMP1
umfassen. Weiter konnte gezeigt werden, dass diese Aminosäuren im
LMP1-TNFR1- sowie im TNFR1-Kontext ausreichend sind, um den NF-κB
und den JNK1 Signalweg zu aktivieren. Die Aktivierung des JNK1
Signalweges durch LMP1-TNFR1-CTAR2 verläuft unabhängig von TRAF2
und abhängig von TRAF6 und auch die Aktivierung des NF-κB
Signalweges durch dieses Rezeptorkonstrukt verläuft TRAF6-abhängig.
Damit konnte gezeigt werden, dass die LMP1-spezifischen
Charakteristika der Signaltransduktion durch die TRADD-Bindestelle
festgelegt und mit ihr zusammen übertragen werden. Obwohl die
Aminosäuren 370-386 von LMP1 funktionell sind, sind sie auch im
LMP1-TNFR1 sowie im TNFR1 Kontext nicht in der Lage Apoptose zu
induzieren. Damit konnte im Rahmen dieser Doktorarbeit gezeigt
werden, dass die Aminosäuren 370-386 von LMP1 intrinsisch und
unabhängig vom Rezeptorkontext den nicht-apoptotischen Phänotyp der
Signaltransduktion festlegen. Außerdem wurde im Rahmen dieser
Doktorarbeit die Beteiligung von TRAF7 an der Signaltransduktion
von LMP1 untersucht. Dazu wurde traf7 aus einer cDNA kloniert.
Zusätzlich wurden verschiedene Deletionsmutanten sowie Fusionen mit
dem fluoreszierenden Protein mRFP hergestellt. Es konnte eine
Threonin-Phosphorylierung von TRAF7(1-383) nachgewiesen werden.
Mittels Fluoreszenzmikroskopie konnte eine Lokalisierung von TRAF7
in vesikulären Strukturen beobachtet werden. Eine Mutante, der der
RING- sowie der Zink-Finger fehlen, zeigte hingegen eine
gleichmäßige zytosolische Verteilung. Außerdem konnte in dieser
Doktorarbeit mit Hilfe von spezifischer siRNA gezeigt werden, dass
TRAF7 an der Aktivierung des JNK1 Signalweges durch LMP1 beteiligt
ist.